弯曲菌属（Campylobacter）是螺旋科下的一属微需氧、革兰阴性菌，能引起人类感染的弯曲菌主要有空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）和结肠弯曲菌（Campylobacter coli）。常见于家畜、家禽的食源性致病菌，主要通过被污染的食物和水传播给人类，是全球范围内引发急性细菌性肠炎的主要病原之一。
主要传染源
- 被污染的未煮熟禽肉（最常见）
- 交叉污染的生鲜乳
- 蔬菜水果及饮水等
常用检测方法
- ISO 10272-1:2017+Amd 1:2023 食品链微生物学-弯曲菌属定性和计数方法 第一部分 定性法
- GB 4789.9-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验（即将被新版替代）
2025年9月2日颁布的GB 4789.9－2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验》将于2026年3月2日正式实施。新标准对范围、检验原理、设备和材料、培养基和试剂、检验程序、操作步骤、结果与报告多个方面都进行了规定。由于文本内容较多，不再一一赘述。
现将其重大变化总结如下：
1. 标准名称和适用范围
- GB 4789.9-2014：名称为《空肠弯曲菌检验》，范围适用于食品中空肠弯曲菌的检验。
- GB 4789.9-2025：名称为《空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验》，范围适用于食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检验。
2. 样品处理更规范
关键点：对于大多数固体和液体样品（不包含：表面涂拭样和水样），均采用 “0.1%蛋白胨水均质 →过滤 → 高速低温离心富集 → 生理盐水重悬” 的流程。
关键点：
- 离心参数：根据基质选择对应的特定离心力（如12,000g或20,000g）、温度（4℃）和时间（如15 min或30 min），以确保有效收集细菌。
- 避免脂质干扰：处理乳制品时，重悬沉淀应小心操作，避免带入脂质层。
3. 增菌步骤简化
统一使用弯曲菌增菌液，取消了2014版中的预增菌步骤，简化操作流程，缩短检测时间。
关键点：
- 微需氧条件：5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气
- 培养：松开装有增菌液的螺口管管口，微需氧条件下，42 ℃ ± 1 ℃ 培养 24 h ± 2 h。
4. 分离培养更高效
关键点：
- 静置吸收：取300μL的增菌液，滴加于贴在平板表面的滤膜（0.45μm）表面后，静置45-60分钟，让液体充分透过滤膜。切勿立即揭膜。
- 揭膜培养：静置后，无菌操作，揭去滤膜，将平板翻转，微需氧条件，42℃±1℃下培养24 h~48 h。此步骤能有效分离受损菌株并减少杂菌干扰。
- 两种分离培养基：同时使用哥伦比亚血琼脂和卡玛丽血琼脂平板，提高检出率。
5. 鉴定方法更多样
弯曲菌属的鉴定：
- 2014版：形态观察、动力观察、氧化酶试验、微需氧25℃生长和有氧42℃生长试验。
- 2025版：形态观察、氧化酶试验、有氧条件下25℃生长试验。删除动力观察和有氧42℃生长试验。
空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的鉴定：
2025版提供了三种鉴定到种水平的方法，从传统生化到分子与质谱，实验室可根据自身条件选择。
方法1：生化试验
过氧化氢酶试验、马尿酸钠水解试验、吲哚乙酸酯水解试验。
关键点：马尿酸钠水解试验加入茚三酮溶液，期间不可摇晃或者震荡试管，否则会导致假阴性。
方法2：实时荧光PCR
使用标准中提供的特异性引物和探针，鉴定空肠弯曲菌和结肠弯曲菌
关键点：
- DNA模板制备：水浴或者金属浴100℃保持10 min，提取需确保彻底裂解细胞，离心后取上清。也可用细菌基因组提取试剂盒按说明书制备。
- 对照设置：设立阳性对照、阴性对照和空白对照。
- Ct值判读：严格按照标准（Ct<30为阳性，Ct≥40为阴性，30≤Ct<40需重试）进行结果判定。
方法3：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）鉴定
目前微生物鉴定领域最先进、最快速的技术之一，可快速得到结果。
总结
GB 4789.9-2025 对2014版的修订，是一次全面的技术升级。通过简化检测流程，引入分子生物学和质谱学等现代检测技术，提升了空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验的效率、特异性和准确性。
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